Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中所逐渐扩展

从第一次显现出肾脏自身蛋白质到显现出1型号白血病药理学征状的方面率在老年人时期就有亦非佳的揭示，多个肾脏自身蛋白质中性的老年人中的有70%在血清转换后10年中患上白血病，而随访15年的老年人这一百分比提高到84%。相对之下，占药理学1型号白血病一半以上的型号1型号白血病的发病机制还不会得到充分的科研人员。

越来越多的人开始运用于分期该系统来下定义1型号白血病的方面：个躯在显现出多种肾脏自身蛋白质时进入第1阶段性，显现出高血压持续性时进入第2阶段性，显现出征状时进入第3阶段性。一些多发肾脏自身蛋白质中性的个躯，在1期和2期，方面较速度慢，并演进为发病的1型号白血病。我们之前揭示了一组成员在首次侦测到多种肾脏自身蛋白质试样后至少10年无白血病的亦非速度慢方面者，这组成员病人人数少，但外观上非常明确。随后，我们断定肾脏自身蛋白质特异性CD8+T细胞内自由基在方面亦非快的病人中的整躯不起因于，但在近期发病和长期起因于的白血病病人中的很难以侦测到。这也许证明，与方面病人相对，这些病人性疾病自由基的调节增强。

早期科研人员证明，尽管调节性T细胞内(Treg)比例较长时间，但白血病病人起因于一些机制毛病，其中的以外对IL-2的自由基能力增高。此外，白血病病人中的的不稳定性CD4+T细胞内也许对调节突显抵抗性，显出为不稳定性T细胞内的选择性移向，自然消除的Treg和躯外消除的诱导Treg，以及蛋白质亲身经历的CD4+T细胞内中的IL-2自由基移向。本科研人员的目的是揭示了CD4+调节性T细胞内(Treg)在一小群亦非亦非快方面者中的的外观上，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

步骤：BOX科研人员是一项以人群为基础的纵向科研人员，在21岁此表确诊的病人亲属中的检查1型号白血病的危险因素。我们之前揭示了长期亦非快方面者的外观上，他们维持多重肾脏自身蛋白质中性最少10年，但不会显现出白血病的药理学征状，速度慢性或非顺利完成性性疾病。随后，10名之后维持无白血病并愿意发放大量肠道试样的亦非快方面者确立T和B细胞内机制量化。在现阶段的科研人员中的，8名速度慢方面者(SP组成员)，中的位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的肾脏自身蛋白质中性。所有的参加者都处于1型号白血病方面的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身蛋白质对某些蛋白质的中性自由基，然而，一名病人已经处于2期至少6年，但不会显现出药理学征状，一名病人被诊断为白血病，该受试者72岁，在采集实验试样时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在科研人员中的对该丝氨酸顺利完成了单独验证。分离外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内法术和T细胞内选择性试验性验证丝氨酸中的Treg的振幅、变异和机制。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、总括和回归)顺利完成无行政官员聚类量化，验证Treg变异。

结果：与卫生丝氨酸相对，来自速度慢方面躯的知觉CD4+T细胞内的行政官员聚类说明了，酪氨酸的知觉CD4+ Treg振幅提高，与组胺诱导的TNFR该系统性蛋白(GITR)解读提高有关。一名HbA1c下降时的病人与方面亦非快者和匹配的小鼠成员相对，Treg谱有所并不相同。机制量化证明，与卫生丝氨酸相对，来自亦非快方面躯的Treg抑制的CD4+不稳定性T细胞内选择性明显受损。显出为对不稳定性CD4+T细胞内CD25和CD134解读的选择性提高。

平面图1 集中的变异量化说明了，CD4+Treg亚型号在速度慢方面表头中的提高。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有丝氨酸的已逝CD4+CD45RA -细胞内上。根据标示出物解读解剖出10个元簇:知觉T细胞内_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞内;HLA-DR + GITR +知觉T细胞内;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)运用于9个并不相同Treg标示出作用于的10个元簇的MST。每个终端代表一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在终端组成员远处上色。每个终端中的的饼平面图透露单个标示出的解读层次。(b)每个元聚类的热平面图，以说明了整躯标示出解读。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)作用于平面图，以及FlowSOM定位的每个元簇的裂口。(e-l)相对重元素为每个metacluster盒等分(重元素> 0.05%)确定为HD和SP组成员:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞内(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞内(l)。蓝色左上角代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩验证。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 运用于CITRUS的预测模型号确认，Treg振幅的提高是方面亦非快的标志。分级门控(a - f)和柑橘量化(g-k)比较SP参加者和匹配的HD参加者在CD4+CD45RA−T细胞内上的区别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的代表性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利完成分离，实时FlowSOM群躯。(b) HD(黑点)和SP(布氏)组成员以及丝氨酸SP 606(蓝色)中的CD25+ cd127的振幅核心内容平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控有界的盒等分;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度制做，箭头突出的簇被定位为SP和HD表头相互间的并不相同。(j)盒等分说明了了在SP(布氏)和HD(灰点)组成员中的，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对重元素(百分比)。(k)直方平面图说明了每个簇的变异(粉红色)和Treg标示出相对解读与文化背景解读(深蓝色);上列，CPUTreg_3;上头一行，CPUTreg_4。文化背景与所有其他簇中的标示出的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩验证

平面图3 与卫生献血者相对，方面亦非快者知觉treg的GITR提高。每个知觉CD4+T细胞内元簇(知觉T细胞内_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞内;HLA-DR + GITR +知觉T细胞内;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个解读标示出的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的解读热平面图(sp606不以外在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中的所有HD(黄色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR解读串联，说明了直方平面图(c)和核心内容平面图(d)。Wilcoxon配对标记秩和验证，p< 0.07(蓝色)所有丝氨酸以外，p< 0.05(深蓝色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不以外在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR解读，从分级门控，从所有HD(黄色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(蓝色)串联，说明了直方平面图(e)和核心内容平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对标记秩验证

平面图4 来自亦非快方面的CD4+ treg细胞内压制不稳定性CD4+T细胞内的能力增高。SP组成员用深蓝色的直通和左上角透露，HD组成员用黑色的直通和左上角透露，蓝色的直通/左上角透露丝氨酸sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(不宜答者)被标示出为CFSE, Treg按推论的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化细胞内，人才培养3天后顺利完成流式细胞内法术侦测。(a-d)与CD4+不宜答者相对不宜的treg人才培养(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD不宜答者人才培养。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE选择性平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性平均值。运用于中性对照(酪氨酸的拥护细胞内不含treg)计算出来选择性平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 不稳定性CD4+T细胞内对亦非快方面的T细胞内已逝化的选择性更敏感。SP组成员用深蓝色的直通和左上角透露，HD组成员用黑色的直通和左上角透露，蓝色的直通/左上角透露丝氨酸sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(不宜答者)被cfsel标示出，treg按推论的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化细胞内，人才培养3天后顺利完成流式细胞内法术(CD25反染)和细胞内因叔父量化。HD Treg与HD、SP或sp606不宜答者共同人才培养。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE选择性调升(b)。(c,d) CD25选择性调升(c)和CD134选择性调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中的的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得出推论的推论是，来自亦非快方面叔父的已逝化知觉CD4+Treg在GITR解读中的得到了扩充和丰沛，强调了进一步科研人员Treg在1型号白血病几率个躯中的的一般而言的必要性。

书名典故：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28