Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者重大突破缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到肾脏自身突变到用到1M-肝炎外科病因的方面率在幼儿时期就有近于佳的详细描述，多个肾脏自身突变阳性的幼儿之前有70%在血清转换后10年内患上肝炎，而随访15年的幼儿这一%缩减到84%。比起，%外科1M-肝炎一半以上的M-1M-肝炎的发病机制还从未给与越来越进一步的分析。

越来越为多的人开始用作已确定子系统来下定义1M-肝炎的方面：个体在用到多种肾脏自身突变时带入第1前期，用到血糖异常时带入第2前期，用到病因时带入第3前期。一些多发肾脏自身突变阳性的个体，在1期和2期，方面较慢，并发展为发病的1M-肝炎。我们之前详细描述了一第一组在首次验证到多种肾脏自身突变试样后至不算10年无肝炎的近于慢方面者，这第一组病症人数不算，但相似性非常明确。随后，我们见到肾脏自身抗体特异性CD8+T细胞会反应在方面较慢的病症之前基本不普遍存在，但在近来发病和长期普遍存在的肝炎病症之前很不易验证到。这也许指出，与方面病症相对，这些病症自身免疫反应的恒定增强。

早期分析指出，尽管恒定性T细胞会(Treg)数量正常，但肝炎病症普遍存在一些系统弱点，其之前仅限于对IL-2的反应意志力降低。此外，肝炎病症之前的物理现象CD4+T细胞会也许对恒定越来越具抵抗性，展示出为物理现象T细胞会的可借减弱，自然现象产生的Treg和肾脏产生的可借Treg，以及抗体境遇的CD4+T细胞会之前IL-2反应减弱。本分析的目的是详细描述了CD4+恒定性T细胞会(Treg)在一个大近于较慢方面者之前的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX分析是一项以人群基础上的纵向分析，在21岁表列确诊的病症亲属之前体检1M-肝炎的小心原因。我们之前详细描述了长期较慢方面者的相似性，他们保有多重肾脏自身突变阳性超过10年，但从未用到肝炎的外科病因，慢性或非开展性自身免疫。随后，10名继续保有无肝炎并想要提供大量体内试样的较慢方面者划入T和B细胞会系统子系统性。在目前的分析之前，8名慢方面者(SP第一组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的肾脏自身突变阳性。所有的参加者都受制于1M-肝炎方面的1期，尽管一些人随后得不到了肾脏自身突变对某些抗体的黄疸，然而，一名病症已经受制于2期至不算6年，但从未用到外科病因，一名病症被病患为肝炎，该受试者72岁，在采集实验者试样时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据子系统性之前对该酪氨酸开展了原则上评估。分开外周血单个核子细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会术和T细胞会可借试验评估酪氨酸之前Treg的阈值、表M-和系统。用作FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和复归)开展无指导聚类子系统性，评估Treg表M-。

结果：与保健酪氨酸相对，来自慢方面体的潜意识CD4+T细胞会的指导聚类显示，激已逝的潜意识CD4+ Treg阈值缩减，与糖皮质激素可借的TNFR相关酶(GITR)强调缩减有关。一名HbA1c上升的病症与方面较慢者和匹配的对照第一组相对，Treg谱有所有所不同。系统子系统性指出，与保健酪氨酸相对，来自较慢方面体的Treg介导的CD4+物理现象T细胞会可借轻微损害。展示出为对物理现象CD4+T细胞会CD25和CD134强调的可借缩减。

绘出1 熟悉的表M-子系统性显示，CD4+Treg亚M-在慢方面字段之前缩减。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集在来自所有酪氨酸的已逝CD4+CD45RA -细胞会上。根据标示出物强调解剖出10个元簇:潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)用作9个有所不同Treg标示出分解成的10个元簇的MST。每个链表象征性一个空降兵(100个空降兵)，较大的元空降兵(10个元空降兵)在链表第一组周围上色。每个链表之前的饼绘出表示单个标示出的强调级别。(b)每个元聚类的热绘出，以显示整体标示出强调。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)分解成绘出，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于重元素为每个metacluster箱本站绘出(重元素> 0.05%)相符为HD和SP第一组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞会(l)。蓝色边框象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 用作CITRUS的预测模M-证实，Treg阈值的缩减是方面较慢的标志。分级门控(a - f)和柑橘子系统性(g-k)比较SP参加者和匹配的HD参加者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)表观CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群体的民族特色绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR强调开展分开，模拟FlowSOM社会群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第一组以及酪氨酸SP 606(蓝色)之前CD25+ cd127的阈值概述绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱本站绘出;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调高强度纹理，箭头厚实的簇被鉴别为SP和HD字段二者之间的有所不同。(j)箱本站绘出显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)第一组之前，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对于重元素(%)。(k)直方绘出显示每个簇的表M-(粉红色)和Treg标示出相对于强调与取材强调(金色);上列，缓存Treg_3;前面一行，缓存Treg_4。取材与所有其他簇之前标示出的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

绘出3 与保健献血者相对，方面较慢者潜意识treg的GITR缩减。每个潜意识CD4+T细胞会元簇(潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个强调标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的强调热绘出(sp606不仅限于在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR强调相联，显示直方绘出(c)和概述绘出(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有酪氨酸仅限于，p< 0.05(金色)酪氨酸SP 606和匹配的HD不仅限于在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR强调，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(蓝色)相联，显示直方绘出(e)和概述绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

绘出4 来自较慢方面的CD4+ treg细胞会管控物理现象CD4+T细胞会的意志力降低。SP第一组用金色的本站和边框表示，HD第一组用黑色的本站和边框表示，蓝色的本站/边框表示酪氨酸sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会开展分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标示出为CFSE, Treg按观察的%滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化细胞会，人才培养3天后开展流式细胞会术验证。(a-d)与CD4+这样的话者相对于应的treg人才培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可借百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可借百分比。用作阳性对照(激已逝的号召细胞会下同treg)计算可借百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差子系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 物理现象CD4+T细胞会对较慢方面的T细胞会已逝化的可借越来越敏感。SP第一组用金色的本站和边框表示，HD第一组用黑色的本站和边框表示，蓝色的本站/边框表示酪氨酸sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会开展分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标示出，treg按观察的%滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化细胞会，人才培养3天后开展流式细胞会术(CD25反染)和细胞会因子子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者主导人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可借百分率(b)。(c,d) CD25可借百分率(c)和CD134可借百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养之前的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差子系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们得出的论证是，来自较慢方面子的已逝化潜意识CD4+Treg在GITR强调之前给与了扩展和丰富，强调了全面分析Treg在1M-肝炎几率个体之前的关联性的必要性。

译者出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28